高(gāo)通(tōng)量測序

原理(lǐ)：新一(yī)代測序的(de)技(jì)術(shù)原理(lǐ)是(shì)采用✘₽(yòng)可(kě)逆性末端邊合成邊測序反應,首先在 DNA片段兩端加上≠¶(shàng) 序列已知(zhī)​δφ∏的(de)通(tōng)用(yòng)接頭構建文(£•wén)庫,文(wén)庫加載到(dào)測序芯片F1owcell上(shφ§àng),文(wén)庫兩端的(de)已知(zhī)序列與F1owcel<α¥l 基底上(shàng)的©π‌(de)oligo序列互補,每條文(wén)庫片段都(">dōu)經過橋式PCR擴增形成一(yī)個(gè)簇,測序時(shí←'Ωλ)采用(yòng)邊合成邊測序反應, 即在堿基延伸過程中,每個‌↔'(gè)循環反應隻能(néng)延伸一(yī)個(gè)正确互補∞σ♠ 的(de)堿基,根據四種不(bù)同的(de)熒光σ ≤₹(guāng)信号确認堿 基種₩↕•>類,保證最終的(de)核酸序列質量,經過多(duō)個(gè)循環後,完整讀(π≥ dú)取核酸序列。

儀器(qì)：Illumina NextSeq500高(gāo)通(tōng÷"•$)量測序平台,不(bù)僅具有(yǒu)高→β€(gāo)通(tōng)量測序能(néng)力和(hé)台式測序儀即載即開(Ω>kāi)(load-and-go)的(de π)簡 便性,而且是(shì)唯±₹÷一(yī)一(yī)個(gè)在人(rén≠€​‍)類全基因組測序中可(kě)一(yī)次性™$₹高(gāo)覆蓋運行(xíng)的(de) NGS系統。♠↑☆×

Sanger測序法

原理(lǐ)：Sanger測序法的(de)技(jì)術(★ ☆€shù)原理(lǐ)是(shì)在DNA聚合酶的(de)作(zuò)× 用(yòng)下(xià)，将dNTP/±&ddNTP的(de)混合物(wù)加到(dào)特異 性引物(φγ®wù)的(de)末端。産生(shēng)長(chánσλ♥g)短(duǎn)不(bù)等的(de)寡核苷酸鏈，并帶有 ®←(yǒu)與四種堿基對(duì)應熒光(guāng)标記。當帶有(yǒu)÷✔₽₩熒光(guāng)标記的(de)寡核苷酸鏈 ‌₽☆≥ 混合物(wù)通(tōng)過測序儀毛細管進行(xíng)電(★​diàn)泳分(fēn)離(lí)時(shí)，π♦就(jiù)能(néng)根據熒光(guāng)α✘顔色判斷對(duì)應堿基，而根據熒光(guān ♣☆g)信号出現(xiàn)的(de)先後順序， 判斷對©↑(duì)應堿基在序列中所處的(de)位置。

儀器(qì)：ABI 3500基因分(fēn)析儀為(wèi)支持驗證和‍&←(hé)法規規範環境中對(duì)儀器(qì)性能(néng)的≥€ (de)嚴格要(yào)求而設計(jì)， 同時(shγ✘β í)保留了(le)生(shēng)命科(kē)學研究人(rén)™£ε員(yuán)心目中Applied Bi↑"§osystems産品一(yī)貫擁有(yǒu)的(de∏®φ★)無可(kě)匹敵的(de)應用(yòng₩↕♣)多(duō)功能(néng)性。

熒光(guāng)定量PCR β∞₹

原理(lǐ)：PCR技(jì)術(shù)的(de)基本原理(lǐ)類≈' 似于DNA的(de)天然複制(zhì)過程，其特異性依賴于↓≤¥λ與靶序列兩端互補的(de)寡核苷酸引物(wù)。 ↑♣ PCR由變性--退火(huǒ)--延伸三個(gè)∞♣基本反應步驟構成：①變性：模闆DNA經加熱(rè✘β )至93℃左右一(yī)定時(shí)間(jiān)後，使‌→模闆DNA雙鏈解離(lí)成單鏈， ↑ ↓Ω 以便它與引物(wù)結合，為(wèi)下(x↑‌δià)輪反應作(zuò)準備；②複性：模闆D•₩δNA經加熱(rè)變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物(wù)與模↔€<γ闆DNA單鏈的(de)互 補←§序列配對(duì)結合；③延伸：DNA模闆--引物(σ​∏wù)結合物(wù)在TaqDNA聚合酶的(d©₽e)作(zuò)用(yòng)下(xià)，以dNTP為(wèi)反應∏σ¶±原料，靶序列為(wèi)模闆，按堿基配對(duì) ♠πσσ 與半保留複制(zhì)原理(lǐ)♥≤∞，合成一(yī)條新的(de)與模闆DNA 鏈互補的(∏≠→÷de)半保留複制(zhì)鏈。重複循環變性--退火(huǒ)--≤↓α延伸三過程，就(jiù)可(kě)獲得(de)更多(d∑♥$δuō)的(de) “半保留複制(zhì)鏈”，而™®且這(zhè)種新鏈又(yòu)可(kě)成為(wèi)下(∏☆•₹xià)次循環的(de)模闆。每完成一(yī)個(gè)循環需1～2分¶"(fēn)鐘(zhōng)， 1～2小(xiǎo)時(shí)就(jiù<σ ≈)能(néng)将待擴目的(de)基因擴增 放(fàng)大 ♣(dà)幾百萬倍。

儀器(qì)：Roche LightCycler? 480實時(shí)熒光(guā×  φng)定量PCR系統可(kě)以讓你(nǐ)實現(xiàn)✔☆₹實時(shí)在線的(de)高(gāo)通(tōng)量"♦∑±快(kuài)速熒光(guāng)定量PC ¥∏ΩR 循環，可(kě)同時(shí)檢測96或38γλσσ4孔闆樣品。結果可(kě)以通(tōng)過PCR循環過程•λ✔™中實時(shí)熒光(guāng)采集和(hé)軟件(jiàn)分(fē♣§♠n)析進行(xíng)定量和(hé)基因型的(de)分(fēn)析。  ☆£∑ 複雜(zá)的(de)光(guāng)學檢測系統可(kě)以進≈£行(xíng)多(duō)重PCR檢測，并适用(yòng)于多(du§™ō)種檢測模式。超過10年(nián)的(de)實✘σ時(shí)定量PCR系統與試劑研發的(de)豐富經驗， "α← 凝聚成今日(rì)業(yè)界的(de) ↓巅峰之作(zuò)。